Pengertian Kromatografi Lapis Tipis, Prinsip, Manfaat, dan Contohnya

Kromatografi lapis tipis (KLT) yang juga dikenal dengan Thin Layer Chromatography (TLC) adalah jenis kromatografi planar. Dimana kromatografi ini biasanya digunakan oleh para peneliti di bidang fitokimia, biokimia, dan lain sebagainya.

Adapun pemanfaatan kromatografi lapis tipis ini ialah untuk mengidentifikasi komponen-komponen dalam campuran senyawa, seperti alkaloid, fosfolipid, dan asam amino.

Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi akan senantiasa dipergunakan untuk memisahkan campuran zat menjadi komponennya. Semua bentuk kromatografi bekerja dengan prinsip yang sama, yaitu semua memiliki fase diam (padat, atau cair yang didukung pada padatan) dan fase gerak (cair atau gas). Fase gerak mengalir melalui fase diam dan membawa komponen campuran bersamanya. Komponen yang berbeda mengalami pergerakan dengan kecepatan yang berbeda pula.

Sehingga kromatografi lapis tipis dilakukan dengan menggunakan lapisan silika gel atau alumina yang tipis dan seragam yang dilapisi pada selembar kaca, ikatan logam atau plastik kaku. Silika gel (atau alumina) adalah fase diam. Fase diam untuk kromatografi lapis tipis juga sering mengandung zat yang berfluoresensi dalam sinar UV. Fase gerak adalah pelarut cair atau campuran pelarut yang sesuai.

Pengertian Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi lapis tipis (KLT) adalah teknik kromatografi yang dipergunakan untuk memisahkan komponen suatu campuran menggunakan fasa diam tipis yang didukung oleh larutan penyangga lembam. Sehingga kromatografi lapis tipis ini dapat dilakukan pada skala analitik sebagai sarana untuk memantau kemajuan suatu reaksi, atau pada skala preparatif untuk memurnikan sejumlah kecil senyawa.

Pengertian Kromatografi Lapis Tipis Menurut Para Ahli

Adapun definisi kromatografi lapis tipis menurut para ahli, antara lain:

1. Keulmans (1959), Kromatografi lapis tipis adalah sebagai teknik pemisahan campuran secara fisika yang didasarkan pada perbedaan distribusi dari komponen-komponen campuran tersebut di antara dua fase, fase diam (padat atau cair) dan fase gerak (cair atau gas).
2. International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC), Pengertian kromatografi lapis tipis ialah  sebagai metode yang digunakan untuk memisahkan komponen dalam sampel, dimana komponen tersebut didistribusikan diantara dua fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam bisa berupa cairan atau padatan yang dilapiskan pada gel atau padatan.

Rumus Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi lapis tipis sebagai alat analisis yang banyak digunakan karena kesederhanaannya, biaya relatif rendah, sensitivitas tinggi, dan kecepatan pemisahan. Pada penyelesaian pemisahan, setiap komponen muncul sebagai bintik-bintik yang dipisahkan secara vertikal. Setiap bitnik dalam rumus penghitungan memiliki faktor retensi (Rf) yang dinyatakan sebagai:

Dimana faktor yang mempengaruhi faktor retardasi adalah sistem pelarut, jumlah material yang terlihat, absorben dan temperatur.

Prinsip Kromatografi Lapis Tipis

Mirip dengan metode kromatografi kolom, dimana kromatografi lapis tipis juga didasarkan pada prinsip pemisahan. Yaitu;

1. Pemisahan bergantung pada afinitas relatif senyawa terhadap fase diam dan fase gerak.
2. Senyawa di bawah pengaruh fase gerak (didorong oleh aksi kapiler) bergerak di atas permukaan fase diam. Selama pergerakan ini, senyawa dengan afinitas yang lebih tinggi ke fase diam bergerak perlahan sementara yang lain bergerak lebih cepat. Dengan demikian, pemisahan komponen dalam campuran tercapai.
3. Begitu pemisahan terjadi, masing-masing komponen divisualisasikan sebagai bintik-bintik pada tingkat perjalanan yang berbeda pada pelat. Sifat atau karakter mereka diidentifikasi dengan menggunakan teknik deteksi yang sesuai.

Prosedur Kromatografi Lapis Tipis

Sebelum memulai Eksperimen Kromatografi Lapis Tipis, mari kita memahami berbagai komponen yang diperlukan untuk melakukan prosedur (KLT) beserta fase yang terlibat.

1. Pelat Kromatografi Lapis Tipis (Thin Layer Chromatography Plates), Pelat siap pakai yang digunakan secara kimiawi inert dan stabil. Fase diam diaplikasikan pada permukaannya yang berupa lapisan tipis. Fase diam pada pelat memiliki ukuran partikel yang halus dan juga memiliki ketebalan yang seragam.
2. Biliki Kromatografi Lapis Tipis (Thin Layer Chromatography Chamber), Bilik digunakan untuk mengembangkan pelat. Ini bertanggung jawab untuk menjaga lingkungan yang stabil di dalam yang akan membantu dalam mengembangkan bitnik. Selain itu, ini mencegah penguapan pelarut dan membuat seluruh proses bebas debu.
3. Fase Gerak Kromatografi Lapis Tipis (Thin Layer Chromatography Mobile phase), Fase gerak adalah fase yang bergerak dan terdiri dari campuran pelarut atau pelarut. Fase ini harus bebas partikulat. Semakin tinggi kualitas kemurnian perkembangan bintik-bintik semakin baik.
4. Kertas Saring Kromatografi Lapis Tipis (Thin Layer Chromatography Filter Paper),Ini harus ditempatkan di dalam bilik. Itu dibasahi dalam fase gerak.

Eksperimen Kromatografi Lapis Tipis

Fase diam yang diterapkan pada pelat dibuat mengering dan stabil.

1. Untuk menerapkan bitnik/titik sampel, tanda tipis dibuat di bagian bawah piring dengan bantuan pensil.
2. Terapkan larutan sampel ke bitnik/titik yang ditandai.
3. Tuang fase gerak ke dalam bilik KLT dan untuk menjaga kelembapan yang sama, letakkan kertas saring yang dibasahi di dalam fase gerak.
4. Tempatkan pelat di bilik KLT dan tutup dengan penutup. Itu disimpan sedemikian rupa sehingga sampel menghadap ke fase gerak.
5. Benamkan piring untuk pengembangan. Ingatlah untuk menjaga bitnik/titik sampel jauh di atas tingkat fase gerak. Jangan celupkan ke dalam pelarut.
6. Tunggu sampai munculnya bintik-bintik. Setelah bintik-bintik berkembang, keluarkan piring dan keringkan. Bintik sampel dapat diamati di bawah ruang sinar UV.

Manfaat Kromatografi Lapis Tipis

Manfaat kromatografi lapis tipis dalam berbagai aplikasi, diantaranya yaitu:

1. Pengujian kualitatif Berbagai obat seperti sedatif, anestesi lokal, obat penenang antikonvulsan, analgesik, antihistamin, steroid, hipnotik dilakukan dengan KLT.
2. KLT sangat berguna dalam analisis biokimia seperti pemisahan atau isolasi metabolit biokimia dari plasma darah, urin, cairan tubuh, serum, dan lain-lain.
3. Kromatografi lapis tipis dapat digunakan untuk mengidentifikasi produk alami seperti minyak esensial atau minyak atsiri, minyak tetap, glikosida, lilin, alkaloid, dan lain-lain.
4. Kromatografi lapis tipis banyak digunakan dalam memisahkan formulasi farmasi multikomponen.
5. Kromatografi lapis tipis digunakan untuk memurnikan sampel apa pun dan perbandingan langsung dilakukan antara sampel dan sampel asli
6. Kromatografi lapis tipis digunakan dalam industri makanan, untuk memisahkan dan mengidentifikasi warna, zat pemanis, dan pengawet
7. Kromatografi lapis tipis digunakan dalam industri kosmetik.
8. Kromatografi lapis tipis digunakan untuk mempelajari apakah suatu reaksi pengendapan selesai.

Kekuarangan Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi lapis tipis juga memiliki beberapa kekurangan, diantaranya yaitu:

1. Pelat kromatografi lapis tipis tidak memiliki fase diam yang lebih lama.
2. Jika dibandingkan dengan teknik kromatografi lainnya, panjang pemisahan dibatasi.
3. Hasil yang dihasilkan dari KLT sulit untuk direproduksi.
4. Karena KLT beroperasi sebagai sistem terbuka, beberapa faktor seperti kelembaban dan suhu dapat mempengaruhi hasil akhir kromatogram.
5. Batas deteksi tinggi dan oleh karena itu jika kita menginginkan batas deteksi yang lebih rendah, kita tidak dapat menggunakan KLT.
6. Kromatografi lapis tipis hanya teknik analisis kualitatif dan bukan kuantitatif.

Contoh Kromatografi Lapis Tipis

Contoh kromatografi lapis tipis misalnya:

1. Menganalisis Analgesik Komersial

Kromatografi lapis tipis dari tiga analgesik dan kafein di bawah sinar UV dilakukan untuk menunjukkan pemisahan yang terjadi. Ini bukan teknik yang direkomendasikan di laboratorium. Karena sifat bahaya sinar matahari, kacamata pengaman polikarbonat (yang menyerap cahaya UV panjang gelombang pendek) dan seluruh sarung tangan karet dipakai.

Lima sampel dijalankan pada satu pelat KLT. Sampelnya adalah:

• Ibuprofen (ICU)
• kafein (CAF)
• u? = obat ‘pereda nyeri’ komersial, digunakan sebagai obat yang tidak diketahui
• Acetominophen (PAR)
• Aspirin (ASP)

Sampel dilarutkan dalam etanol untuk memberikan bintik (spotting) di piring. Pelat KLT dijalankan dalam gelas kimia terbuka dengan panjang gelombang pendek sinar UV cahaya menggunakan etil etanoat sebagai pelarut elusi. Kemudian dapat kita amati pergerakan bintik ungu tua (sampel) selama menjalankan pelat.

Sangat mudah untuk melihat dua bahan aktif dalam obat pereda nyeri komersial yang tidak diketahui dengan membandingkan bintik-bintik dengan bahan referensi standar yang berjalan di kedua sisi (kafein dan asetominofen).

Itulah tadi artikel yang bisa kami kemukakan pada segenap pembaca berkenaan dengan pengertian kromatografi lapis tipis menurut para ahli, rumus, prinsip, manfaat, kekuarangan, dan contohnya. Semoga memberikan wawasan bagi kalian.